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并对获得的蛋白进行含 量 测 定 和 SDS - P A G E 电 泳 分 析

来源:未知作者:admin 更新时间:2019-10-07 21:14
新疆农业科学 2017,54(7) :1305 -1312 Xinjiang Agricultural Sciences doi: 10.6048/j .issn. 1001 -4330.2017.07.017 独行菜属植物种子总蛋白4 种提取方法的比较 丁金鹏, 张 娜 , 李 群 (新 疆 大 学 生 命 科 学 与 技 术 学 院 , 乌 鲁 木 齐 8 30 0

  新疆农业科学 2017,54(7) :1305 -1312 Xinjiang Agricultural Sciences doi: 10.6048/j .issn. 1001 -4330.2017.07.017 独行菜属植物种子总蛋白4 种提取方法的比较 丁金鹏, 张 娜 , 李 群 (新 疆 大 学 生 命 科 学 与 技 术 学 院 , 乌 鲁 木 齐 8 30 0 4 6) 摘 要 : 【 目的】 研究适用于抱茎独行菜和独行菜种子 SDS -P A G E 电 泳 和 双 向 电泳的蛋白样品提取方法, 为 研究两种独行菜种子蛋白组学奠定基础。【 方法 】 采 用 4 种蛋白质提取方法提取种子总蛋白, 测定和分析蛋 白产量和 SDS - PAGE 电泳图谱。【 结果】 TCA/丙酮 提 取 法 获 得 蛋 白 量 较 多 , 杂质少, 电泳条带多且清晰;裂 解液提取法蛋白的产量最高, 有拖尾且杂质多;Tm - HC1提取法和苯酚提取法的蛋白产量低, 杂质少;裂解液 -PA G E 电泳时易产生高丰度蛋白的干扰。对 比 TCA/ 丙酮提取法和 苯酚提取法获得的两种独行菜种子总蛋白 SDS - PAGE 图谱, 发 现 有 6 条蛋白差异条带。 【 结论】 TCA/丙酮提 取法提取两种独行菜种子总蛋白效率高, 纯度高且杂质少, 可 用 于 SDS - PAGE 电泳和双向电泳分析;两种独 行 菜 种 子 蛋 白 SDS-PAGE 电泳的差异谱带可为甄别两种独行菜种子提供参考依据。 关键词:独行菜;抱茎独行菜;种子总蛋白; 蛋白质提取; SDS - PAGE 中图分类号:S188 文献标识码 :A 文 章编 号 =1001 -4330(2017)07 -1305 -08 〇 引言 【 研究意义】 抱茎独 行 菜 和 独 行 菜 为 十 字 花 科草本植物, 种子可入药[1’ 2], 植株能作为新疆早 春转场的优质牧草, 因两种独行菜能够利用融雪 水在早春低温环境下萌发生长, 故具有一定的抗 寒能 力 , 研究其耐寒分子机制能为植物耐寒机制 提供理论依据, 蛋白质是生命活动的主要承担着, 研究植物在低温条件下差异表达的蛋白, 能够更 好地找出与抗低温相关的关键基因和调控机制, 故研究探讨适用于两种独行菜种子蛋白的提取方 法, 为后续两种独行菜种子蛋白组学研究奠定基 础 。【 前人研究进展】 抱莲独行菜( iep/ 心 ? per/oratou L.)和 提取法和苯酚提取法获得的蛋白在 SDS 菜不能萌发。赵惠新等[4]研 究 发 现 , 独行菜种子 在露白前经常温刺激后可在4°C 低 温 下 萌 发 , 通 过 CDNA - AFLP 技术筛选了独行菜幼苗与低温 胁迫相关的 18 个 基 因 , 但未能揭示两种独行菜种 子在低温萌发过程中的分子调控机制。此 外 , 李 萍萍等[5]采用了 TCA/丙酮提取法对独行菜萌发 阶段的蛋白表达进行了双向电泳分析, 获得了独 行菜种子常温处理后萌发的蛋白表达图谱, 但目 前两种独行菜种子对低温的差异性响应的调节机 制仍不清楚。【 本研究切入点】 对两种独行菜种 子低温下萌发进行差异蛋白组学分析可为阐明种 子萌发的温度调控机制提供线索。抱茎独行菜和 独行菜种子均为粘液种子[6~8], 吸水膨胀后种皮 外包裹大量多糖, 极大影响种子蛋白的提取, 研究 两种独行菜种子蛋白提取方法进行筛选和优化。 【 拟解决的关键问题】 采 用 4 种蛋白提取方法, 提 取两种独行菜种子蛋白, 并对获得的蛋白进行含 量 测 定 和 SDS - P A G E 电 泳 分 析 , 以期找到适用 独 行 菜 apeto/wTii Wild )均为 独行菜属草本, 在新疆主要生长在荒漠和半荒漠 地带 。对两种独行菜耐受早春低温的萌发机制和 差异性进行了 一 系 列 的 研 究 :孟 君 等 [3]发 现 , 在 4°C低温 条 件 下 , 抱茎独行菜种子能够萌发, 独行 收稿日期( R eceived) :2017 - 03 - 25 基金项 目 : 国家自然科学基因项目 “ 新疆濒危植物高山离子芥抗冷相关功能基因组分析与关键基因克隆 ” ( 3 1 1 6 0 0 5 1 );新疆维吾尔自治 区重大科技专项 “ 新疆早春短命植物与模式植物拟南芥的比较基因组学与功能基因组学研究 ” 作 者 简 介 : 丁金鹏 ( 1991 通讯作 者 : 李 群 ( 197 - ) ( 200840102 - 4 0 ) , 女, 甘肃武威人, 硕士, 研究方向为植物逆境生理与分子生物学, ( E - m a i l ) 1 5 9 2 3 9 7 6 3 3 @ q q .C 〇 m 1 -), 女, 北京人, 副教授, 博士, 硕士生导师, 研究方向为植物逆境生理与分子生物学, ( E - m a i l ) liq u n _ 0 0 7 @ 126. 1306 新疆农业科学 54卷 于两种独行菜种子 SDS - P A G E 和双向电泳的蛋 白样品提取方法。 冷 1 mL Tris - 平衡酚颠倒混勻, 冰上静置10 min, 室温震荡 10 min;4°C ,12 000 r/min 离心 20 min 吸取酚相, 加入等体积 Tris - 平衡酚再提取一次; 向二次得到的酚相中加入5 倍体积的0. 1 M 预冷 醋酸铵甲醇溶液, 匀浆 后 置 于 - 2 0 ° C 过夜;4 °C ,12 000 ! ? / min 离 心 20 min,收集沉淀,分别用等体积 预冷甲醇和丙酮洗涤两次, 置于冰上通风吹干8〇 °C 保存备用。 1.2.1.3 裂解液提取法 参照李晓琳等[11]的方法 并 加 以 调 整 。取两 种独行菜种子粉末各〇 . 1 g ,分 别 加 入 1 m L 蛋白 质裂解液(7 M 尿 素 , 2M 硫脲 , 4 % CHAPS, 50

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